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生化試劑盒

脂肪酶(LPS)試劑盒- 微量法
恒遠生物生化試劑盒應(yīng)用領(lǐng)域廣泛,涉及酶類、氧化應(yīng)激、鐵死亡、肝功能、腎功能、糖酵解、無機鹽離子、脂質(zhì)代謝、植物抗逆性等。檢測樣本類型豐富,涉及多種體液、組織、細胞、食品、植物、藥物、化妝品等。主要的檢測儀器為酶標(biāo)儀,分光光度計和熒光酶標(biāo)儀。我們將以高度的責(zé)任感和出色的產(chǎn)品質(zhì)量為客戶提供高效專業(yè)的生化代測服務(wù)和實驗技術(shù)解決方案。豐富的經(jīng)驗、優(yōu)良的品質(zhì)、充足的庫存、準(zhǔn)確的交貨時間、極具競爭力的價格,所有這些保證了我們向您提供的最專業(yè)最優(yōu)質(zhì)的服務(wù)
中文名稱

脂肪酶(LPS)試劑盒

規(guī)格 96樣
貨號

L-723-SH

價格 ¥600
樣本類型 血清,血漿,組織勻漿,細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清液等
檢測范圍 詳見說明書
檢測方法

微量法

貨期 3-5天
說明書 咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取
文獻 咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取


    意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

LPS又稱甘油酯水解酶,催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油(或者甘油二酯和單酯)。LPS廣泛的存在于各種生物中。血清中LPS的異常增高常見于胰腺炎和胰腺癌。

 測定原理:

LPS催化油酯水解成脂肪酸,利用銅皂法測定脂肪酸生成速率,即可計算LPS活性。

 自備儀器和用品:

研缽、臺式離心機、震蕩混勻器、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、甲苯80mL、冰和蒸餾水。

 試劑組成和配制:

試劑一:液體65mL×24保存。

試劑二:液體10mL×1瓶,4保存。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩20min。

試劑三:甲苯80mL×1瓶,4保存(自備)。

試劑:液體10mL×1瓶,4保存。

標(biāo)準(zhǔn)品:液體10 μL×1瓶,10 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,4保存。臨用前加入3.168 mL甲苯,充分溶解。

 粗酶液提?。?/span>

1. 組織:按照組織質(zhì)量(g)試劑一(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。12000g,4離心10min,取上清置冰上待測。

2. 細菌、真菌:按照細胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后12000g,4,離心10min,取上清置于冰上待測。

3. 血清等液體: 直接檢測。

 LPS測定操作:

1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長到710 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑一和試劑二置于37水浴預(yù)熱30min。

3. 1.5mL EP管中依次加入下列試劑

試劑名稱(μL

空白管

測定管

蒸餾水

150

 

樣本

 

50

試劑一

300

300

試劑二

 

100

37℃振蕩反應(yīng)10 min

試劑三

800

800

37℃振蕩反應(yīng)10 min后,8000g25,離心10min,取上清液

試劑名稱(μL

空白管

測定管

標(biāo)準(zhǔn)管

上清液

400

400

 

標(biāo)準(zhǔn)品

 

 

400

試劑四

100

100

100

37℃振蕩反應(yīng)5 min后,靜置5min,取200μL上層液加入微量石英比色皿/96孔板,于710nm處測定吸光值。

注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

 LPS活性計算公式

1. 組織、細菌或細胞LPS活性

1)按照蛋白濃度計算

活性單位定義:37℃中每毫克蛋白每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。

LPS (μmol/min/mg prot) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管A標(biāo)準(zhǔn)- A空白管)]×V反總÷Cpr×V樣)÷T

=16×[(A測定管-A空白管A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]÷Cpr

2)按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義:37℃中每克組織每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位

LPS (μmol/min/g 鮮重) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]×V反總÷W×V÷V樣總)÷T

=16×[(A測定管-A空白管A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]÷W

3)按照細菌或者細胞數(shù)量計算

活性單位定義:37℃每104個細胞每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位

LPS (μmol /min/104cell) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]×V反總÷(細胞數(shù)量×V÷V樣總)÷T

=16×[(A測定管-A空白管A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]÷細胞數(shù)量

2. 血清等液體LPS活性

活性單位定義:37℃每毫升血清每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。

LPS (μmol /min/mL) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]×V反總÷V÷T

=16×[(A測定管-A空白管A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]

C標(biāo)準(zhǔn)品:10 μmol/mL;V反總:反應(yīng)總體積,0.8mL;V樣:反應(yīng)中加入樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒;W:樣本質(zhì)量,g;T:催化反應(yīng)時間,10 min


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