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生化試劑盒

醇?;D(zhuǎn)移酶(AAT)活性測(cè)定試劑盒-可見分光光度法
恒遠(yuǎn)生物生化試劑盒應(yīng)用領(lǐng)域廣泛,涉及酶類、氧化應(yīng)激、鐵死亡、肝功能、腎功能、糖酵解、無機(jī)鹽離子、脂質(zhì)代謝、植物抗逆性等。檢測(cè)樣本類型豐富,涉及多種體液、組織、細(xì)胞、食品、植物、藥物、化妝品等。主要的檢測(cè)儀器為酶標(biāo)儀,分光光度計(jì)和熒光酶標(biāo)儀。我們將以高度的責(zé)任感和出色的產(chǎn)品質(zhì)量為客戶提供高效專業(yè)的生化代測(cè)服務(wù)和實(shí)驗(yàn)技術(shù)解決方案。豐富的經(jīng)驗(yàn)、優(yōu)良的品質(zhì)、充足的庫存、準(zhǔn)確的交貨時(shí)間、極具競(jìng)爭力的價(jià)格,所有這些保證了我們向您提供的最專業(yè)最優(yōu)質(zhì)的服務(wù)。

中文名稱

醇酰基轉(zhuǎn)移酶(AAT)活性測(cè)定試劑盒

規(guī)格 24樣
貨號(hào)

L-770-SH

價(jià)格 ¥2000
樣本類型 血清,血漿,組織勻漿,細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等
檢測(cè)范圍 詳見說明書
檢測(cè)方法

可見分光光度法

貨期 3-5天
說明書 咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取
文獻(xiàn) 咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取

    意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義:

AAT是一個(gè)多功能蛋白大家族,主要負(fù)責(zé)催化生物體內(nèi)各種酰基化和去?;磻?yīng),在基因表達(dá)、代謝和信號(hào)傳導(dǎo)中具有重要作用。

 

測(cè)定原理:

AAT催化乙酰CoA轉(zhuǎn)移乙酰基到丁醇,釋放的CoA還原DTNB生成TNB;TNB412nm有吸收峰,測(cè)定412 nm吸光度增加速率可計(jì)算AAT活性。

 

自備儀器用品:

研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、無水乙醇

 

試劑組成和配制:

提取液:液體25mL×1瓶,4℃保存;

試劑一:液體25mL×1瓶,4℃保存;

試劑:粉劑×1瓶,-20℃保存。

試劑粉劑×1支,4℃避光保存。

 

粗酶液提?。?/span>

1. 組織:按照組織質(zhì)量(g)提取液(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿。8000g,4離心10min,取上清置冰上待測(cè)。

2. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后8000g4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

3. 液體:直接檢測(cè)。

 

AAT測(cè)定操作:

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長到412 nm,蒸餾水調(diào)零。

2、工作液的配制:臨用前在試劑二瓶中加入22.5mL試劑一,充分混勻待用。用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

3、試劑三的配制:臨用前加無水乙醇1.25mL充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存。

4、 空白管:在Ep管或96孔板中加入50μL提取液和900μL工作液,充分混勻,35反應(yīng)15min,加入50μL試劑三,充分混勻,25靜置10min,測(cè)定412nm處吸光值,記為A空白管。

5測(cè)定管:在Ep管或96孔板中加入50μL樣本和900μL工作液,充分混勻,35反應(yīng)15min,加入50μL試劑三,充分混勻,25靜置10min,測(cè)定412nm處吸光值,記為A測(cè)定管?!?/span>A=A測(cè)定管- A空白管,空白管只要做一管。

AAT活性計(jì)算公式

1)按照蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義:每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個(gè)酶活單位

AAT (nmol/min /mg prot) = △A ÷×d×V反總÷V×Cpr÷T = 98.04×△A÷Cpr

2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義:每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個(gè)酶活單位。

AAT (nmol/min /g 鮮重) = △A ÷×d×V反總÷(W×V÷V樣總) ÷T = 98.04×△A÷W

3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義:每104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個(gè)酶活單位

AAT (nmol/min /104cell) = △A ÷×d×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V÷V樣總) ÷T

= 98.04×△A÷ 細(xì)胞數(shù)量

4)按液體體積計(jì)算

活性單位定義:每毫升樣品每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個(gè)酶活單位

AAT (nmol/min /mL) = △A ÷×d×V反總÷V÷T =98.04×△A

TNB消光系數(shù),13600L/mol/cm;V反總:反應(yīng)總體積,1mL;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:蛋白含量,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,15 min。


甜菜堿(Betaine)試劑盒
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