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生化試劑盒

羧酸酯酶(CarE)試劑盒-微量法
恒遠(yuǎn)生物生化試劑盒應(yīng)用領(lǐng)域廣泛,涉及酶類、氧化應(yīng)激、鐵死亡、肝功能、腎功能、糖酵解、無機(jī)鹽離子、脂質(zhì)代謝、植物抗逆性等。檢測樣本類型豐富,涉及多種體液、組織、細(xì)胞、食品、植物、藥物、化妝品等。主要的檢測儀器為酶標(biāo)儀,分光光度計(jì)和熒光酶標(biāo)儀。我們將以高度的責(zé)任感和出色的產(chǎn)品質(zhì)量為客戶提供高效專業(yè)的生化代測服務(wù)和實(shí)驗(yàn)技術(shù)解決方案。豐富的經(jīng)驗(yàn)、優(yōu)良的品質(zhì)、充足的庫存、準(zhǔn)確的交貨時(shí)間、極具競爭力的價(jià)格,所有這些保證了我們向您提供的最專業(yè)最優(yōu)質(zhì)的服務(wù)。

中文名稱

羧酸酯酶(CarE)試劑盒-微量法

規(guī)格 96樣
貨號(hào)

L-737-SH

價(jià)格 ¥590
樣本類型 血清,血漿,組織勻漿,細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等
檢測范圍 詳見說明書
檢測方法

微量法

貨期 3-5天
說明書 咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取
文獻(xiàn) 咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取

    正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

哺乳動(dòng)物CarE,也稱脂族酯酶(aliesterase),廣泛分布于組織和器官,屬于絲氨酸水解酶家族。CarE催化含酯鍵、酰胺鍵和硫酯鍵的內(nèi)源性與外源性物質(zhì)水解,但不能催化水解乙酰膽堿及其類似物CarE參與脂質(zhì)運(yùn)輸和代謝,并且與多種藥物、環(huán)境毒物以及致癌物的解毒和代謝有關(guān),有機(jī)磷農(nóng)藥可結(jié)合并且抑制CarE活性。

注意:空白管只需測定一次。

 

CarE活性計(jì)算公式

a. 使用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

1 組織中CarE活性

(1) 按蛋白濃度計(jì)算

CarE活性單位定義:每mg組織蛋白在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個(gè)酶活單位。

 

CarE酶活(U/mg prot)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總÷(Cpr×V)÷T

= 13.67×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計(jì)算

CarE活性單位定義:每g組織在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個(gè)酶活單位。

CarE酶活(U/g 鮮重)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總×V樣總÷V樣)÷W÷T

=13.67×(△A測定管-△A空白管)÷W

2 細(xì)菌或細(xì)胞中CarE活性

CarE活性單位定義:1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在37反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為一個(gè)CarE活性單位。

CarE酶活(U/104 cell)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總×V樣總÷V樣)÷細(xì)胞密度(104 cell/mL÷T=13.67×(△A測定管-△A空白管細(xì)胞密度(104 cell/mL

3. 液體中CarE活性

CarE活性單位定義:每毫升樣品在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個(gè)酶活單位。

CarE酶活(U/mL )= (△A測定管-△A空白管) ×V反總÷V樣÷T

=13.67×(△A測定管-△A空白管)

V反總:反應(yīng)體系總體積,205μL=2.05×10-4LV總:上清液總體積,1 mL;V樣:加入上清液體積(mL)0.005 mL;Cpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量(g);T:反應(yīng)時(shí)間(min),3min。

 

b. 使用96孔板測定的計(jì)算公式如下

1 組織中CarE活性

(3) 按蛋白濃度計(jì)算

CarE活性單位定義:每mg組織蛋白在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個(gè)酶活單位。

 

CarE酶活(U/mg prot)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總÷(Cpr×V)÷T

= 13.67×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr

(4) 按樣本鮮重計(jì)算

CarE活性單位定義:每g組織在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個(gè)酶活單位。

CarE酶活(U/g 鮮重)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總×V樣總÷V樣)÷W÷T

=13.67×(△A測定管-△A空白管)÷W

2 細(xì)菌或細(xì)胞中CarE活性

 

CarE活性單位定義:1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在37反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為一個(gè)CarE

性單位。

CarE酶活(U/104 cell)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總×V樣總÷V樣)÷細(xì)胞密度(104 cell/mL÷T=13.67×(△A測定管-△A空白管細(xì)胞密度(104 cell/mL

3. 液體中CarE活性

CarE活性單位定義:每毫升樣品在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個(gè)酶活單位。

CarE酶活(U/mL )= (△A測定管-△A空白管) ×V反總÷V樣÷T

=13.67×(△A測定管-△A空白管)

V反總:反應(yīng)體系總體積,205μL=2.05×10-4L;V總:上清液總體積,1 mL;V樣:加入上清液體積(mL),0.005 mLCpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣品質(zhì)量(g);T:反應(yīng)時(shí)間(min),3min



 

測定原理:

CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,固籃顯色;在450 nm光吸收增加速率,計(jì)算CarE活性。

 

自備儀器和用品

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。

 

試劑組成和配置:

試劑一:液體×1瓶,4保存。

試劑二:液體15mL×2瓶, 4℃保存;

試劑三:粉劑×2支, 4℃保存,臨用前取1支試劑三,加0.6ml無水乙醇充分溶解;

試劑四:粉劑×2支,-20℃保存,臨用前取1支試劑四,加少量試劑二溶解;

工作液配制:臨用前配制,向1瓶試劑二中,加入溶解后的試劑三和試劑四各1支,充分溶解,過濾,4℃避光保存,可用1周。

 

粗酶液提取:

細(xì)菌、細(xì)胞樣品制備

收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每200萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL試劑一,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);12000g 4℃離心30min,取上清液待測。

2、組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿;12000g 4℃離心30min,取上清液待測。

3、液體:直接測定

 

測定操作:

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長到450 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二置于37水浴中預(yù)熱30 min。

3. 空白管:微量玻璃比色皿/96孔板,依次加入5μL蒸餾水和200μL試劑二,迅速混勻,于450nm處測定3min內(nèi)吸光值變化,第10s吸光值記為A1,第190s吸光值記為A2。△A空白管=A2-A1

4. 測定管:微量玻璃比色皿/96孔板,依次加入5μL上清液和200μL試劑二,迅速混勻,于450nm處測定3min內(nèi)吸光值變化,第10s吸光值記為A3,第190s吸光值記為A4。△A測定管=A4-A3

注意:空白管只需測定一次。

 

CarE活性計(jì)算公式

a. 使用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

1 組織中CarE活性

(1) 按蛋白濃度計(jì)算

CarE活性單位定義:每mg組織蛋白在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個(gè)酶活單位。

 

CarE酶活(U/mg prot)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總÷(Cpr×V)÷T

= 13.67×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計(jì)算

CarE活性單位定義:每g組織在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個(gè)酶活單位。

CarE酶活(U/g 鮮重)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總×V樣總÷V樣)÷W÷T

=13.67×(△A測定管-△A空白管)÷W

2 細(xì)菌或細(xì)胞中CarE活性

CarE活性單位定義:1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在37反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為一個(gè)CarE活性單位。

CarE酶活(U/104 cell)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總×V樣總÷V樣)÷細(xì)胞密度(104 cell/mL÷T=13.67×(△A測定管-△A空白管細(xì)胞密度(104 cell/mL

3. 液體中CarE活性

CarE活性單位定義:每毫升樣品在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個(gè)酶活單位。

CarE酶活(U/mL )= (△A測定管-△A空白管) ×V反總÷V樣÷T

=13.67×(△A測定管-△A空白管)

V反總:反應(yīng)體系總體積,205μL=2.05×10-4L;V總:上清液總體積,1 mL;V樣:加入上清液體積(mL)0.005 mL;Cpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量(g);T:反應(yīng)時(shí)間(min),3min。

 

b. 使用96孔板測定的計(jì)算公式如下

1 組織中CarE活性

(3) 按蛋白濃度計(jì)算

CarE活性單位定義:每mg組織蛋白在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個(gè)酶活單位。

 

CarE酶活(U/mg prot)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總÷(Cpr×V)÷T

= 13.67×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr

(4) 按樣本鮮重計(jì)算

CarE活性單位定義:每g組織在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個(gè)酶活單位。

CarE酶活(U/g 鮮重)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總×V樣總÷V樣)÷W÷T

=13.67×(△A測定管-△A空白管)÷W

2 細(xì)菌或細(xì)胞中CarE活性

 

CarE活性單位定義:1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在37反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為一個(gè)CarE性單位。

CarE酶活(U/104 cell)= (△A測定管-△A空白管) ×V反總×V樣總÷V樣)÷細(xì)胞密度(104 cell/mL÷T=13.67×(△A測定管-△A空白管細(xì)胞密度(104 cell/mL

3. 液體中CarE活性

CarE活性單位定義:每毫升樣品在37℃反應(yīng)體系中每分鐘催化吸光值增加1定義為1個(gè)酶活單位。

CarE酶活(U/mL )= (△A測定管-△A空白管) ×V反總÷V樣÷T

=13.67×(△A測定管-△A空白管)

V反總:反應(yīng)體系總體積,205μL=2.05×10-4L;V總:上清液總體積,1 mL;V樣:加入上清液體積(mL)0.005 mL;Cpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣品質(zhì)量(g);T:反應(yīng)時(shí)間(min),3min。


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