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生化試劑盒

超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒
恒遠(yuǎn)生物生化試劑盒應(yīng)用領(lǐng)域廣泛,涉及酶類、氧化應(yīng)激、鐵死亡、肝功能、腎功能、糖酵解、無(wú)機(jī)鹽離子、脂質(zhì)代謝、植物抗逆性等。檢測(cè)樣本類型豐富,涉及多種體液、組織、細(xì)胞、食品、植物、藥物、化妝品等。主要的檢測(cè)儀器為酶標(biāo)儀,分光光度計(jì)和熒光酶標(biāo)儀。我們將以高度的責(zé)任感和出色的產(chǎn)品質(zhì)量為客戶提供高效專業(yè)的生化代測(cè)服務(wù)和實(shí)驗(yàn)技術(shù)解決方案。豐富的經(jīng)驗(yàn)、優(yōu)良的品質(zhì)、充足的庫(kù)存、準(zhǔn)確的交貨時(shí)間、極具競(jìng)爭(zhēng)力的價(jià)格,所有這些保證了我們向您提供的最專業(yè)最優(yōu)質(zhì)的服務(wù)
中文名稱

超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒

規(guī)格 96樣
貨號(hào)

A-001-SH

價(jià)格 ¥700
樣本類型 血清,血漿,組織勻漿,細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等
檢測(cè)范圍 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)
檢測(cè)方法

微板法

貨期 3-5天
說(shuō)明書(shū) 咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取
文獻(xiàn) 咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取


注 意:正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

 

測(cè)定意義:

SODEC 1.15.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用,生成 H2O2 O2SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是 H2O2 主要生成酶,在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。

 

測(cè)定原理:

通過(guò)黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-),O2-可還原氮藍(lán)四唑生成藍(lán)色甲臜,后者在 560nm 處有吸收;SOD 可清除 O2-,從而抑制了甲臜的形成;反應(yīng)液藍(lán)色越深,說(shuō)明 SOD 活性愈低,反之活性越高。

 

需自備的儀器和用品:

酶標(biāo)儀、離心機(jī)、移液器、96 孔板、研缽、冰和蒸餾水

 

試劑的組成和配制:

提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;

試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。

 

粗酶液提取:

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):提取液體積(mL)為 500~10001 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。

 

測(cè)定步驟:

1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 560nm

2、 將試劑二用蒸餾水稀釋兩倍,用多少配多少。(試劑二和蒸餾水 11 稀釋)

3、 將一瓶試劑四用 5mL 蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完),再用蒸餾水稀釋 4 倍,用多少配多少(試劑四和蒸餾水 13 稀釋)。

4、 測(cè)定前將試劑一、三和四在 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其他物種)水浴 5min 以上。

5、樣本測(cè)定(在 EP 管或 96 孔板中依次加入下列試劑)

 

試劑名稱(μL)

測(cè)定管

對(duì)照管

試劑一

45

45

試劑二

2

2

樣本

18

 

蒸餾水

 

18

試劑三

35

35

試劑四

100

100

充分混勻,室溫靜置 30min 后,560nm 處測(cè)定各管吸光值 A。

 

注意事項(xiàng):

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。

2、對(duì)照管只需要做一管。

3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。

4、SOD 為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?

對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是

1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;

2) 沒(méi)有按順序加試劑;

3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min 可以延長(zhǎng)到 40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10 倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。


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